12位固相萃取装置是一种样品前处理技术，它是由液固萃取柱和液相色谱技术相结合发展而来的。主要用于样品的分离、纯化和浓缩。与传统的液-液萃取方法相比，可以提高分析物的回收率，更有效地将分析物与干扰成分分离，减少样品预处理过程，省时省力。
那么如何操作12位固相萃取装置呢？
1、选择SPE小柱或滤膜
首先，根据待测样品的性质，选择保留能力强的固定相。如果待测样品带负电，可以使用阴离子交换填料，否则，可以使用阳离子交换填料。如果是中性分析物，可以用反相填料进行萃取。SPE小柱或过滤器的尺寸和规格应取决于样品中分析物的浓度。对于低浓度的体内样品，一般使用尽可能少的固定相填料来提取更大体积的样品。
2、激活
萃取前，用装满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml溶剂冲洗滤膜，以保持SPE填料湿润，因为填料的干燥会降低样品保留值，以及每个小柱的干燥程度也会影响恢复。率再现性。先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料，因为甲醇可以润湿吸附剂表面并渗透到非极性硅胶键合相中，使硅胶更容易被水润湿；然后加入水或缓冲液冲洗，创造与样品溶剂兼容的环境并提高回收率。
3、上样
一般可以采用四种方法：
(1)用0.1mol/L酸或碱调节pH<3或pH>9，离心提取上层；
(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质，取上清，用水或缓冲液稀释，然后提取；
(3)用酸或无机盐沉淀蛋白质，取上清液，调整pH值，然后提取；
(4)超声15分钟后，加水和缓冲液，提取上清液。流速应控制在1ml/min，过快的流速不利于分析物与固定相的结合。
4、冲洗
反相SPE的清洗溶剂多为水或缓冲液，清洗液中可加入少量有机溶剂、无机盐或pH值。小柱中加入的清洗液不应超过一根小柱的体积，SPE滤膜为5-10ml。
5、洗脱
应选择5-10ml离子强度较弱但能洗掉分析物的洗脱溶剂。如果需要更高的灵敏度，可以将洗脱液蒸干，然后在进样前用流动相将残留物复溶。体内样品洗脱后含水，可冷冻干燥。保留能力弱的SPE填料可以用小体积、弱洗脱液清洗分析物，然后用C18柱等极性强的HPLC分析柱对洗脱液进行分析。如果分析物可以被离子化，则调节pH值以抑制样品的离子化以增强分析物在反相SPE填料中的保留，在洗脱过程中调节pH值使其离子化并用较弱的溶剂洗脱，收集然后调整洗脱液的pH值，以在HPLC分析中实现更好的分离。在洗脱过程中，应降低流速，使用两次小体积洗脱代替一次大体积洗脱，以提高回收率。
更新时间：2022-07-26 
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